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中压层析柱的操作步骤

更新时间:2023-03-14      点击次数:773
  中压层析柱是利用生物分子间所具有纯化技术,它是利用生物分子间存在的特异性相互作用,通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上,利用分子间亲和力的特异性和可逆性,对另一个分子进行分离纯化。
 
  中压层析柱的操作步骤:
 
  1 准 备
 
  在装柱前,建议采用静置沉淀法,确定胶悬液浓度,我们的填料是以50%的浓度储存在20%的乙醇中。
 
  2 检 查
 
  装柱需借助装柱系统完成,所有的组件必须处于完好的状态,检查玻璃部件,特别注意端部,应更换末端有缺口的柱子。
 
  3 清 洗
 
  柱子和装柱器在使用前,应用20%乙醇润洗,检查筛板,确保所选筛板的孔径和所选填料的粒径相匹配,确保底端部件和顶部适配器的管件连接牢固。
 
  4 安 装
 
  1) 柱子用柱夹或铁架台固定,确保柱管没有倾斜,垂直于地面,避免装好的柱子出现宽泛而弯曲的条带。
 
  2)向柱中加入蒸馏水或20%乙醇至几厘米的高度,利用重力作用让柱中液体从底端管线中流出,排出气泡,在柱底预留至少1厘米高度的液体,并用堵头连接管线的锥形接头。
 
  3)再次混匀胶悬液,确保悬液均一,借助玻璃棒将胶悬液尽可能一次性贴壁倒入柱管中,用装柱缓冲液加满柱管。
 
  4)将适配器管线连接注射器,排出适配器管线中的气泡。逆时针旋转调节帽将固定帽、调节帽旋转至调节杆最底端。
 
  5)打开底部管线堵头,将适配器垂直放在玻璃管上,顺时针拧紧固定帽,请确保整个操作在一条直线上完成。注意不要引入气泡。
 
  6)按照填料说明书推荐的流速运行设备,不同的填料推荐的装柱流速不同,很多填料会需要分2个阶段进行装柱,第一步用推荐流速加快沉降,第二步用更高的流速(不超过推荐流速的30%)压实填料,请在流速开启前阅读填料说明书。继续运行至胶面稳定,读取刻度并记录。
 
  7)停止设备流速,将适配器顺时针向下拧至读取刻度下2~3mm,继续运行流速,如果胶面发生改变,可以重新调节适配器高度。装柱完成。
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